浙江微流纳米生物技术有限公司
脂质体作为药物载体具有多样性脂溶性药物 和水溶性药物都能以较高的浓度载入脂质体中且 脂质体毒性低生物相容性好其作 为药物载体已被广泛研究。在一些治疗领域中脂 质体已经成功用于药物的缓控释和定位传递。已 上市的注射用脂质体制剂有 ＡｍＢｉｓｏｍｅ两性霉素 Ｂ 脂质体、ＤａｕｎｏＸｏｍｅ柔红霉素脂质体、Ｍｙｏｃｅｔ多柔 比星脂质体、Ｄｏｘｉｌ多柔比星隐形脂质体、ＤｅｐｏＣｙｔ 阿糖胞苷多囊泡脂质体以及 ＤｅｐｏＤｕｒ硫酸吗啡多 囊泡脂质体等还有很多脂质体制剂已进入临床研 究阶段。为保证产品的质量和使用时的安全性用 于注射的脂质体较终需要经过灭菌步骤或者无菌 操作过程这就使其大规模生产复杂化。脂质体的 物理和化学不稳定性使灭菌成为注射用脂质体产业化的难点。现根据近几年的研究综述脂质体可 能适用的几种灭菌方法或无菌操作。
1 脂质体的不稳定性
1．1 化学不稳定性 即使在没有特异的氧化剂存在下磷脂的脂肪酸 链也能被痕量的过渡金属、辐射或者声裂催化氧化。 脂质的不饱和度越高越易氧化形成自由基。脂质氧 化会影响脂质和脂质体的性质使双分子层的流动性 增加。磷脂易于水解特别是在水分散相中脂质水 解成游离脂肪酸与2-酰基和3-酰基溶血磷脂。
1．2 物理不稳定性 脂质体易发生的物理变化包括聚集或融合、沉 淀、药物损失。这些不稳定性能被化学变化诱导的双分子层缺陷被加热、冷冻以及相转变等物理因 素所诱发。
2 灭 菌
2．1 高压灭菌 脂质体的高压灭菌存在着脂质体或包封药物 的物理和化学变化以及包封药物损失的风险。
制备不同脂质组成的多种脂质 体并将其在 121℃下灭菌 20ｍｉｎ。观察发现在生 理盐水中热力灭菌后脂质体发生聚集而在等渗的 糖或者多元醇溶液中则不聚集。含有高过氧化值 的蛋黄磷脂 （ＥｇｇＰＣ）的脂质体分散相在热力灭菌 后略显淡黄色而使用低过氧化值的蛋黄磷脂、氢 化蛋黄磷脂 （Ｈ-ＥｇｇＰＣ）或者二棕榈酰磷脂酰胆碱 （ＤＰＰＣ）则无颜色变化。在中性 ｐＨ下通氮气也能 防止颜色变化。在热力灭菌过程中带阴离子的 6-羧基荧光素从负电荷脂质体 （ＥｇｇＰＣ／胆固醇／蛋 磷脂酰甘油 ）中泄漏而其在热力灭菌和长期储存 过程中都未从正电荷脂质体 （ＥｇｇＰＣ／胆固醇／硬脂 酰胺 ）中泄漏。因此若由低过氧化值的脂质形成 的荷电脂质体分散在 ｐＨ接近 6．5的等渗的糖或 多元醇溶液中溶液中溶解氧的量降到较低且若 是离子型水溶性药物则包载在带相反电荷的脂质 体中则对其进行热力灭菌是可行的。
2．2 过滤灭菌
过滤灭菌仅适合于粒径在200ｎｍ以下的脂质 体 以 及 低 粘 度 的 分 散 相且 需 较 高 的 压 力 （25ｋｇ·ｃｍ -2 ）。也有文献报道在高于相变温度下 过滤由于脂质膜在液晶态下柔性增加大于 0．2μｍ的脂质体也能滤过。将包载羧基荧光素的多室脂质 体移除游离药物且经过 0∙1、0∙2或0．4μｍ孔径 的聚碳酸酯膜使粒径均匀化后采用塑料注射器使 其通过由聚碳酸酯 （Ｎｕｃｌｅｐｏｒｅ）、醋酸纤维素 （Ｍｉｎｉ- ｓａｒｔ ）或聚偏氟乙烯 （ＰＶＤＦ） （Ｍｉｌｌｅｘ-ＧＶ）构成 的消毒过滤器。脂质体易于滤过且粒径无显著变 化也无磷脂损失。包载物的泄漏很轻微低于 5％除了粒径300ｎｍ的脂质体滤过0．2μｍ聚碳酸 酯膜时泄漏率大于 5％。
以冷冻干燥单相溶液的新方法制备脂 质体。将脂质和水溶性载体材料溶解在叔丁基醇／ 水共溶剂中形成均匀的单相溶液将形成的溶液 通过0．2μｍ的滤器过滤灭菌然后低压冻干。加入水后冻干制品可自发形成均匀的脂质体制剂。 采用该方法可制备无菌无热原的具有狭小粒度分 布的亚微粒脂质体。
2．3 γ辐照灭菌
γ辐照是脂质体的可以选择的灭菌方法其主 要问题在于可能引起脂质和药物的辐射损伤以及 产生毒理学方面的问题。
将平均粒径为0．2μｍ的脂质体 在氮气气氛中以高达 5×10 4Ｇｙ的剂量辐照灭菌。 （ＤＰＰＣ／ＤＰＰＧ∶10／1）的脂质体和 （ＥＰＣ／ＥＰＧ∶10／ 1）的脂质体在不含海藻糖的10ｍｍｏｌ·Ｌ -1磷酸盐缓 冲液中 （ｐＨ7．4）经 γ辐照后大量降解。而在含 10％海藻糖作为冻干保护剂条件下辐射损伤减 少。但是海藻糖与 γ辐照的诱导产物反应导致 ｐＨ值大大下降因而限制了冷冻或冷冻干燥脂质 体分散相作为降低辐射损伤的方法的使用。γ辐 照后脂质体的粒径没有发生变化双分子层的刚性 也几乎无变化。在 10％海藻糖存在下（ＤＰＰＣ／ ＤＰＰＧ∶10／1）脂质体的相变温度在 γ辐照前后差异 很小但在无海藻糖的情况下差异变大。
2．4 无菌操作 当上述方法都不适用时如对热敏感的脂质 体则应进行无菌操作。
多囊脂质体在结构上 不同于常规脂质体内部脂膜以非同心圆形式存在 外观像泡沫粒径更大 （5～100μｍ中间粒径为 10 ～30μｍ）不适合于终端灭菌因此在制备时必须 要无菌操作。制备多囊脂质体的前列步是将含有药物的前列水相与含有 脂质的有机溶剂进行混合乳化形成水包油型乳剂。 第二步将初乳与第二水相机械混合形成混悬在第 二水相内的溶剂小球。第三步通过蒸发、减压或者 氮气流移除小球中的有机溶剂形成了 ＭＶＬ。较后 再通过交叉流滤过交换缓冲液除去未包封的药物。
2．5 其他灭菌方法
将制得的碘曲仑脂质体低压冻干后用环氧乙烷灭菌。在冻干前加入冻干保护剂以保 持脂质体的粒径。当每克脂质采用4ｇ海藻糖时 冻干和灭菌对样品的形态学性质无不利影响。灭 菌后7ｄ在任何样品中均无微生物生长。
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