浙江微流纳米生物技术有限公司
临床上多同时使硫喷妥钠、利多卡因、阿片类镇静剂等与丙泊酚注射液的混合液进行推注以降低局部注射痛的不良反应在患者当中的发生率。丙泊酚( propofol) 是静脉全麻药的一种，也是临床应用较多的静脉麻醉药之一，具有快速、短效，无蓄积等优点。但加入其他药物有可能会破坏乳剂稳定性，改变其理化性质，增加了医疗事故的发生可能。
有报道称丙泊酚注射液的注射痛与水相中游离丙泊酚的含量有关，丙泊酚中/长链脂肪乳比丙泊酚长链脂肪乳更安全，其降低了高甘油血脂症的发生率。基于中链三酰甘油在水中的溶解度是长链三酰甘油的100 倍，有较好的增溶能力，且能迅速代谢清除，本实验拟制备丙泊酚的中链脂肪乳，以解决丙泊酚的注射痛问题，并对其处方及工艺进行筛选和优化。
实验仪器
微射流高压均质机；激光粒度测定仪；pH 计； 声波细胞粉碎仪；旋转蒸发仪
实验试剂
丙泊酚、维生素E、泊洛沙姆188、中链甘油三酸酯、油酸、甘油、氢氧化钠、大豆卵磷脂Lipoid S100、纯水
实验过程
脂肪乳的制备
取处方量的卵磷脂( 无水乙醇溶解) 、油酸、维生素E 加入中链甘油三酸酯中，搅拌均匀，用旋转蒸发仪除去乙醇，加入丙泊酚，混匀作为油相。将泊洛沙姆188和甘油用适量的注射用水在室温下溶解，作为水相。两相分别预热至60 ℃，将油相缓缓加入水相中，声分散成初乳，加水至100%，调节pH，经高压均质，得到终乳，充氮灌封于西林瓶中，热压灭菌即得。
脂肪乳的工艺优化
1）声分散时间的考察
按优化处方配制油、水两相，置于60 ℃ 保温，然后将两相在60 ℃ 混合，分别用500 W 声5，10，15，20 min，通过测定其稳定性系数来评价初乳的稳定性。结果见表1，声10 min 的初乳较稳定，故选择声时间为10 min。
表1 声分散时间对初乳稳定性的影响
2）均质压力的考察
按上述优选的处方和工艺制备初乳，调节pH 至8 ～ 9，移至高压均质机中，分别用400，600，800 bar 的压力均质10 次，制得不同的终乳，粒径大小、分布PI 值及pH 的变化见表2。
表2 不同均质压力考察的结果
从表2可以看出，随着压力的升高，乳滴的粒径变小，而对于pH 和粒径分布PI 值的影响不明显。400 bar 压力下制备的样品稳定性好，故选择均质压力为400 bar。均质次数的考察按上述优选的处方和工艺制备初乳，调节pH 至8 ～ 9，移至高压均质机中，400 bar 压力下分别均质5，10，15，20 次，制得不同的终乳，粒径大小和分布见表3。400 bar 压力下，均质10 次时粒径小至，粒径分布PI 变化不再明显。因此，优选均质次数为10 次。
表3 不同均质次数考察的结果
3） 灭菌条件的选择
按上述优选处方及工艺制备丙泊酚脂肪乳，分别于115 ℃灭菌30 min 及121 ℃灭菌15 min，结果2 个条件下灭菌乳剂均没有出现分层，颜色仍然为均一的乳白色，可见蓝色乳光。由表4 可知，无论是粒径、PI 值、还是pH 都变化不明显，但灭菌过的样品室温密封放置3 d 后，121 ℃ 灭菌15 min 条件下的样品颜色变黄，而115 ℃ 灭菌30 min 条件下的样品仍是均一乳白色，故条件选择为115 ℃灭菌30 min。
表4 不同灭菌条件考察结果n = 3
丙泊酚脂肪乳的优化处方及工艺通过正交试验设计与单因素考察，确定了丙泊酚脂肪乳的较优处方与工艺。处方为: 丙泊酚1 g、中链甘油三酸酯10 g、大豆卵磷脂1． 2 g、泊洛沙姆188 3． 6 g、油酸0． 16 g、维生素E 0． 08 g、甘油2． 25 g、注射用水加至100 mL。制备过程如下: 将大豆卵磷脂( 无水乙醇溶解) 、油酸、维生素E 加入中链甘油三酸酯中，搅拌均匀，旋蒸除去乙醇，加入丙泊酚，混匀作为油相。将泊洛沙姆188和甘油用适量的注射水在室温下溶解，作为水相。两相分别预热至60 ℃，将油相缓缓加入水相中，500 W 声10 min 分散成初乳，加入剩余处方量的水，0． 1 mol·L － 1 氢氧化钠溶液调节pH 8 ～ 9，移至高压均质机中400 bar 压力下匀化10次，得到终乳，过0． 45 μm 的微孔滤膜，灌封于西林瓶中，115 ℃热压灭菌30 min 即得。
4）丙泊酚脂肪乳表征
取适量的丙泊酚脂肪乳，用水稀释200 倍，用激光粒度测定仪测定其粒径大小和分布。测定了3 批样品，平均粒径为( 129． 87 ± 0． 85) nm，平均PI 为( 0． 20 ± 0． 03) ，平均pH 值为( 8． 45 ± 0． 01) 。
讨论
提高脂肪乳的稳定性是本实验的难点。乳化剂的选择、稳定剂的比例对脂肪乳的稳定性影响很大。大豆卵磷脂和泊洛沙姆188 联合使用可以提高乳剂的稳定性，其原因可能是形成复合凝聚膜，使乳化膜强度增大，乳剂不易破裂。油酸的加入，对乳剂的稳定性起了关键作用。油酸的加入使得乳剂的稳定性系数KE降低，尤其可以使脂肪乳耐受热压灭菌。这可能因为油酸是脂肪酸，既有亲水基团也有亲油基团，可以镶嵌在油水界面上。油酸的表观pH 为7． 4 ～ 7． 5，在碱性条件下，油酸大量电离，定位在油水界面上，使得乳滴的Zeta电位绝对值升高。由于电荷的排斥作用，而阻碍了乳滴的合并。
在工艺优化中发现，声乳化时间不宜过长，因为长时间声可能导致乳滴破坏，同时体系的温度也会迅速上升，也可能引起大豆卵磷脂水解。均质制备终乳时，均质压力不宜过大，因为均质过程产生的高温容易导致大豆卵磷脂的水解和抗氧化剂的损耗，从而出现热压灭菌的样品室温密封放置3d后颜色变黄。均质次数考察发现，并非越多越好，均质到一定程度，平均粒径达到小至，继续增加均质次数就可能增加乳滴间的碰撞，出现乳滴合并，平均粒径增大。静注乳剂平均粒径要求小于或者接近1 μm，因为在人体中乳糜颗粒粒径多为1 μm。本实验制备的丙泊酚脂肪乳粒径符合要求，静脉注射液pH 的要求是4 ～ 9，本实验较终灭菌后的脂肪乳也符合要求，但其包封率、载药量、以及游离脂肪酸的检查、过氧化物值、甲氧基苯胺值、与葡萄糖和生理盐水的配伍稳定性等有待进一步研究。而且是否可以减轻注射痛，还有待进一步的药理实验验证。
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