浙江微流纳米生物技术有限公司
1.材料和方法
按发明专利文献 从人胚胎细胞中提取磷脂类物质制备成含卵磷脂量为的多相脂质体,用丙三醇作为主要分散相 。 把人胚胎脑细胞制备成细 胞匀浆, 冻融后按 1:1稀释, 0.12Mpa高压分解45min,过滤后用胰蛋白酶分解,离心后用G6砂蕊漏斗过滤, 滤液100%作为脑素,按1%脑素含量通过3000r/min均质机揽拌,使之包封于多相脂质体中 分别取稀释成1%的脑素和多相脂质体一1%脑素 (简称脂质体一脑素)50μL进行酸水解, 进行常规氨基酸分析 。
2.结果
由于酸水解,氨基酸检测时色氨酸未测。脑素和脂质体一脑素的绝大部分氨基酸种类基本相似,但脂质体脑素中未检测到精氨酸 、γ一 氨基丁酸鸟氨酸。脑素和脂质体一脑素的氨基酸组成和含量见附表 。
从附表中可以看出,脑素包封于脂质体后,上述处理未能打破脂质体使之逸出脑素, 因此,包封于脂质体的脑素在本实验中较难检测出 。 这里检测的绝大部分是未包封于脂质体的脑素,按总氨基酸含量推算,未包封于脂质体的脑素大约为包封前脑素的16.77% 。其中精氨酸、鸟氨酸 、γ一 氨基丁酸由于易被包封于脂质体中,所以未检出。天冬氨酸 、谷氨酸 、甘氨酸 、丙氨酸 、亮氨酸 、赖氮酸较易被脂质体包封,而胧氨酸、撷氨酸、甲硫氨酸、酪氨酸等不易被脂质体包封。
3.讨论
多相脂质体是一种多层双亲分子组成的双分子球囊,具有亲水相和亲脂相,由于它同生物膜十分接近,已被广泛用于研究生物膜的结构与功能,用于药物载体系统,减少药物毒性,并具有对特殊细胞和器官的导向性能力,这在皮肤药疗方面具有巨大的潜在应用价值,鉴于其对皮肤 的外用疗效以及类膜性质,脂质体也很受化妆品行业欢迎 。
脂质体既能包裹水溶性药物 又能包裹脂溶性药物 。 按专利文献制备的多相脂质体,本身已包裹了一些磷脂类营养物,通过包裹水溶性营养物一脑 素,主要观察多相脂质体对脑素的包裹情况 。 一般药物在小单室脂质体和大单室脂质体中的包封率可高达为65%,并且包封率一般采用凝胶过滤法 、速离心法和透析方法进行检测。而我们由于用丙三醇作为多相脂质体分散相,上述方法已不能适用, 采用脑素包封前后测定其氨基酸的种类和含量的变化,可间接反映多相脂质体的包封率及稳定性 。 包封后测出的脑素中总氨基酸含量仅为包封前的16.77%, 换句话说,多相脂质体包封1%脑素的包封率大约为83.23%, 当然 这一数值尚不甚精确, 这是因为包封率受众多因素影响 。 一般来说,多相脂质体若 用膜层稳定剂后,包封率较小单室脂质体要高得多。本研究由于采用同源的多相脂质体和1%脑素原料,且一部分氨基酸与多相脂质体的亲和力较高, 所以包封率和稳定性均较高。
多相脂质体包封脑素后, 由于具有高亲和力和载体作用, 脂溶性磷脂营养素和水溶性脑素中氨基酸、小分子肽等营养素可快速进人皮肤细胞,并缓慢释放,为皮肤细胞不断提供水分、脂类、氨基酸等,增加皮肤水分、防止皮肤细胞干燥,改善皮肤细 胞光洁度, 通过补充皮肤细胞膜磷脂成 分,稳定细胞膜结构,并可在皮肤细胞的表面形成一层脂膜, 保持皮肤细胞不受紫外线等伤害, 通过不断提供同源氨基酸和小分 子肚,保证皮肤细胞营养,防止皮肤细胞过早衰老,达到抗皱护肤自的。多相脂质体一脑素可快速进入皮肤细胞中不堵塞皮肤毛孔,不影响皮肤细 胞的呼吸 。 因此采用脂质体一1%脑素作为皮肤外用药物和化妆品原料是比较理想的。
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